稀釋涂布平板法計數微生物的四大誤區
發(fā)布時(shí)間：2024-10-08 瀏覽次數：2872
今天要跟大家分享的是一篇關(guān)于平板菌落計數的文獻，雖然這篇文章更多的是針對應試的，但是個(gè)人覺(jué)得對于我們在工作和科研實(shí)驗中的實(shí)際操作也是挺有用的。特別是對單位換算，樣品稀釋操作不是很清楚的小伙伴應該會(huì )有一定幫助。
稀釋涂布平板法計數微生物的計算公式為：
每克樣品中的菌株數 ＝ （Ｃ ÷ Ｖ） × Ｍ，Ｃ 代表某一稀釋度下平板上生長(cháng)的平均菌落數，Ｖ 代表涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積，Ｍ 代表稀釋倍數。
誤區1 對平均菌落數的理解
公式中的 Ｃ 不一定是所有實(shí)驗所得菌落數的平均值。 為增強實(shí)驗說(shuō)服力和減小實(shí)驗誤差，實(shí)驗需設置對照實(shí)驗和重復實(shí)驗。若空白對照有菌，說(shuō)明實(shí)驗可能被污染，相當于質(zhì)控不在控，這種情況下不能將平板菌落數去平均值，而是需要分析可能污染的原因并重新進(jìn)行實(shí)驗。
重復實(shí)驗是將同一稀釋度的稀釋液至少涂布３個(gè)平板（一般設置３—５ 個(gè)平板），選擇菌落數在 30—300 的平板計算平均菌落數。若重復實(shí)驗中某個(gè)平板的菌落數與其他差別甚遠，如四個(gè)平板的菌落數分別為 42、200、256、234，菌落數42與其他數值差異過(guò)大，說(shuō)明該平板操作過(guò)程有誤，則該菌落數應舍棄。 若舍棄后不足三個(gè)平板，不能用菌落數相近的兩個(gè)平板取平均值，應找到原因并重做實(shí)驗。 若計算每克樣品中的某種菌株數，則 Ｃ應代表某一稀釋度下平板上生長(cháng)的符合該菌菌落特征的菌落數的平均值，培養基上其他菌種形成的菌落數不能一并計算在內。 如檢測１L待測水樣中的大腸桿菌數目只統計大腸桿菌菌落數的平均值。
誤區二 對稀釋倍數的判定
平板中菌落數過(guò)少會(huì )導致計數誤差過(guò)大，菌落數過(guò)多又會(huì )造成計數困難，為確保有效活菌數的準確測定，應合理設定稀釋倍數。待測樣品中微生物數量越多，所需稀釋倍數越大，而微生物數量越少，所需稀釋倍數越小。
如測定土壤中細菌數量，一般選用１０４、１０５和 １０６ 倍稀釋?zhuān)粶y定放線(xiàn)菌數量，一般選用１０３、１０４和 １０５倍稀釋?zhuān)粶y定真菌數量，一般選用 １０２、 １０３和 １０４倍稀釋?zhuān)粶y定自來(lái)水中大腸桿菌數量，一般不稀釋?zhuān)苯舆M(jìn)行涂布培養。
圖源：人教版高中生物教材
誤區三 對體積與質(zhì)量的單位換算
微生物計算公式中的 Ｖ 代表涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積，通常為0.1 ｍＬ，但若待測樣品中微生物數目較少，接種0.1mL經(jīng)培養后平板上菌落數達不到30，可增大接種量（如接種 １ ｍＬ）。
1cm3=1000μＬ=1mL=0.001L
體積和質(zhì)量的換算公式是：體積 ＝ 質(zhì)量÷ 密度（Ｖ ＝ ｍ／ ρ），水的密度是 １ ｇ／ cm3，則質(zhì)量為１g的水的體積是 １ cm3即１ｍＬ。
誤區四 對統計誤差的分析
從稀釋涂布平板計數的原理分析，運用該方法統計的菌落數往往比活菌的實(shí)際數目低，因為樣品一般不易完全分散成單個(gè)細胞，當兩個(gè)或多個(gè)活細胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落。從稀釋涂布平板計數的過(guò)程分析，稀釋倍數是否合適、涂布是否均勻、培養環(huán)境是否能保證微生物正常生長(cháng)、計數是否存在漏計或重復計數等情況都會(huì )影響統計結果。 除此之外，還要考慮培養時(shí)間對菌落數目的影響，菌落數目需要每隔一段時(shí)間統計一次，選取菌落數目穩定時(shí)的記錄作為結果，防止因培養時(shí)間不足遺漏菌落的數目。
知其然，還要知其所以然。
參考文獻：張艷娟,陳兆亮,郭建坤.稀釋涂布平板法計數微生物的四大誤區[J].中學(xué)生理科應試,2024,(04):52-53.
來(lái)源：網(wǎng)絡(luò )，內容版權歸原作者所有。
說(shuō)明：文章、視頻、圖片等所有內容，僅用于學(xué)習交流，若有侵權內容及其他涉法內容，請及時(shí)聯(lián)系刪除或修改，特此聲明。
