金葡標準檢驗方法常見(jiàn)的難點(diǎn)
發(fā)布時(shí)間：2024-11-20 瀏覽次數：1809
來(lái)源：環(huán)凱轉載于“ 六扇門(mén)Study”公眾號，作者~SIXDoors
前段時(shí)刻，某專(zhuān)業(yè)群有老師發(fā)了一張BP平板圖
“哇，好漂亮的涂布板”
（圖片來(lái)自網(wǎng)友分享）
由此引發(fā)了大家對金葡標準檢驗方法的討論
1、怎么操作才能涂布出這么漂亮的板？
2、GB4789.10-2016版標準對金葡典型和可疑菌落的表述不清晰，新標準會(huì )如何修改？
BP板涂布操作技巧寶典
選擇合適的稀釋梯度，這個(gè)很關(guān)鍵，如果稀釋梯度不夠，菌落密集疊加，很難分開(kāi)，上圖如果菌落再少一半，就更完美了。
平板里傾注的BP培養基不能太薄，4mm較好。
使用微量移液槍將樣品轉移到平板上，控制樣品的流量，使其不會(huì )濺出平板。
涂布時(shí)最好使用翹起頂端L棒，涂布更均勻。標準中要求涂布0.3，0.3，0.4，盡量不要涂0.4，平均成0.3，0.35，0.35，分布相對更平均一點(diǎn)，也更容易吸收。
涂布時(shí)盡量涂干，如果涂布后，液體吸收不好，可以放在潔凈工作臺上，繼續吹五分鐘就可以了。
冷藏過(guò)的平板需要恢復到室溫后再使用，同時(shí)注意平板表面不能有冷凝水，免得影響涂布效果。最好一個(gè)一個(gè)培養皿攤開(kāi)，恢復室溫會(huì )比較快，否則疊放在一起，中間的平板可能會(huì )沒(méi)有恢復到室溫。
典型和可疑菌落的表述很重要
上圖是2016版標準對BP平板上金黃色葡萄球菌典型菌落的描述，大家看看懵圈不？
首先，8.4.1對菌落的描述，這是典型菌落？還是可疑菌落？
描述的有“不透明沉淀環(huán)和清晰帶”的算，沒(méi)有的也算，到底啥樣的算？
還是前半部分描述的是典型菌落，后半部分是可疑菌落？
其次，8.4.2先選擇了典型菌落，然后8.4.3再從典型菌落里選擇可疑菌落，誰(shuí)告訴小六，到底怎么選？
結果計算的要求又是計算典型菌落，“可疑菌落”選出來(lái)是干啥用的？
8.4.2還說(shuō)3個(gè)平板所有菌落數合計在20CFU~200CFU 之間的平板,計數典型菌落數；
第九章又說(shuō)“典型菌落數在20CFU~200CFU 之間”，這前后表達也不一致??！
典型和可疑菌落的表述很重要，與后面計數和確認時(shí)挑取菌落的選擇原則有密切關(guān)系。
坊間傳聞，GB4789.10啟動(dòng)修訂
標準會(huì )修改Baird-Parker 平板菌落形態(tài)描述，提高標準適用性。建議增加一些典型圖例，方便大家理解。
此外，新標準還計劃修改以下內容：
（1）第一法定性檢測，增加金黃色葡萄球菌顯色平板法；
（2）第二法定量檢測，增加“金黃色葡萄球菌測試片”初篩方法，提高檢測效率，據說(shuō)已經(jīng)完成實(shí)驗室內驗證；
（3） 附錄 B 增加金葡總腸毒素檢測，優(yōu)化腸毒素提取流程，據說(shuō)是酶聯(lián)免疫方法，可采用試劑盒或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫設備進(jìn)行檢測，現在還在驗證階段；
（4）標準中增加“質(zhì)控菌株”。
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