細胞培養的原理和步驟，簡(jiǎn)單好用以及精確！
發(fā)布時(shí)間：2022-03-28 瀏覽次數：3689
親愛(ài)的小伙伴們，大家好，今天我們要講解的是，細胞培養的原理和步驟，簡(jiǎn)單好用以及精確，學(xué)完之后，相信你對細胞培養將不再陌生。接下來(lái)就開(kāi)始今天的學(xué)習吧！
細胞培養：體外模擬體內需要的生長(cháng)條件（溫度，營(yíng)養等），然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達的篩選，比如還可以測定某個(gè)基因敲低或是過(guò)表達的產(chǎn)物，這個(gè)當然要結合WB來(lái)看最后基因的表達產(chǎn)物是否升高哦，細胞培養的應用還有很多，歡迎大家在后臺留言。
細胞培養的基本原理：細胞傳代（生存空間和營(yíng)養不足，長(cháng)得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時(shí)也要分離出一部分細胞，要加入新的培養液），換液（生存空間和營(yíng)養剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長(cháng)好，所以要洗和加入新鮮培養基），凍存（太多了，先存起來(lái)，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久），復蘇（解凍，恢復吃飯的能力，恢復生長(cháng)。）這四步。
細胞培養的基本步驟（一定要明白每個(gè)步驟的意義和目的）：
01細胞傳代（貼壁細胞）：
試劑：PBS（PBS緩沖液），胰酶，含血清的培養基；
流程：顯微鏡下看一看培養皿里的細胞多不多，太多（80%~90%）會(huì )導致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì )導致細胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細胞太多了，把一部分細胞移出來(lái)，加入適量的培養基放入孵箱繼續培養，這叫傳代。
02細胞換液：
試劑：PBS，含血清的培養基；
流程：先吸掉代謝廢物（即細胞瓶中的培養液），再用PBS洗一洗，由于細胞長(cháng)得不是很多，細胞之間沒(méi)有黏在一起，因此不需要加入胰酶來(lái)消除它們之間的粘性。由于細胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養基，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養。
03細胞凍存：
試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養基；
流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細胞時(shí)，細胞內液會(huì )形成冰晶，滲透壓會(huì )發(fā)生改變，細胞結構會(huì )出現紊亂，會(huì )導致細胞出現損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時(shí)，會(huì )散發(fā)熱量，所以?xún)龃嬉盒杼崆爸苽洹?/p>
因為細胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過(guò)夜，最后放入液氮罐。
04細胞復蘇：
試劑：含血清的培養基；
流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀(guān)察，當看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開(kāi)凍存管，迅速將細胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養液，放入孵箱中，培養。還有就是：復蘇的細胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養液。
最后：在這里特別感謝B站上無(wú)私分享的細胞培養的視頻資源，正是你們的分享，幫助了我，我也會(huì )繼續把我學(xué)到的繼續分享，幫助更多的人！如果大家想要獲得這份視頻資源的話(huà)，可以在后臺私聊小編獲取哦，里面關(guān)于細胞培養的知識講解的超級詳細！明天我會(huì )繼續介紹細胞培養的一些注意事項以及WB的操作的步驟和原理。最后，如果覺(jué)得我的推文對你有用的話(huà)，請點(diǎn)個(gè)關(guān)注哦！
