培養基不能正常凝固的原因及解決辦法
發(fā)布時(shí)間：2024-11-11 瀏覽次數：689
一、有關(guān)瓊脂的知識
瓊脂，又名瓊膠或凍粉，因最初從日本海藻中提取，故又稱(chēng)“洋菜”。瓊脂成品為白色或淡黃色粉末狀或細條形，主要是由復雜的大分子多糖類(lèi)物質(zhì)組成。其水解物的組成有40%的D-半乳糖、3%硫酸酯和2%丙酮酸，實(shí)際上，它是瓊脂膠和瓊脂糖兩種成分的混合物。瓊脂膠是瓊脂糖的硫酸酯，瓊脂糖主要依靠氫鍵的引力形成網(wǎng)狀結構。因此，瓊脂糖凝膠的穩定性比那些以化學(xué)鍵交聯(lián)而形成網(wǎng)狀結構的凝固劑的穩定性要差一些。
瓊脂溶于熱水而不溶于冷水，因此在配制培養基時(shí)需煮制瓊脂。隨著(zhù)溫度的升高，瓊脂逐漸溶解，當溫度下降到40℃時(shí)則開(kāi)始凝固。配制培養基時(shí)應注意，由于各地生產(chǎn)的瓊脂的質(zhì)量不同，同樣濃度的瓊脂水溶液凝固后在硬度、透明度及色澤上會(huì )有所差異。劣質(zhì)瓊脂不僅凝固性差，而且帶有很多雜質(zhì)。
二、有關(guān)瓊脂凝固性的知識
作為培養基的凝固劑，瓊脂的凝固性除與瓊脂本身的品質(zhì)有關(guān)外，還會(huì )受到滅菌溫度、滅菌時(shí)間、瓊脂量和pH值的影響。
（1）0.7%～0.8%的瓊脂水溶液在冷卻后會(huì )很好凝固，對于常用的微生物培養基，瓊脂的用量基本趨于穩定，通常條狀瓊脂的用量約為2%，粉狀瓊脂的用量為1%～1.5%。
（2）培養基的酸堿度對瓊脂的凝固性影響很大，是瓊脂在正常濃度范圍內能否凝固的關(guān)鍵因素，當4.30<ph<10.05時(shí)，瓊脂水溶液均可正常凝固，超過(guò)此范圍，瓊脂的凝固性變差，培養基不能正常凝固。
（3）在4.30<ph<10.05范圍內，瓊脂的凝固性受高溫高壓(1.1kg cm2，120℃)的影響很小，延長(cháng)高溫高壓滅菌時(shí)間或反復高溫高壓處理均不會(huì )影響其凝固性。pH較高(5.0-8.0)時(shí)，瓊脂濃度是影響凝固等級的主要因素。
（4）當配制的固體培養基pH低于3.44時(shí)，其凝固性會(huì )受到滅菌溫度、滅菌時(shí)間、瓊脂量和pH值的影響。其中滅菌溫度、滅菌時(shí)間與瓊脂凝固性呈負相關(guān)，瓊脂量、pH值與瓊脂凝固性呈正相關(guān)。但在這些因素中，瓊脂量的影響不是很大，因此在該類(lèi)培養基的滅菌過(guò)程中應該重點(diǎn)把握好滅菌溫度、滅菌時(shí)間和pH值。使用較低的滅菌溫度，較短的滅菌時(shí)間，適當地增加培養基的pH值就可以顯著(zhù)提高瓊脂的凝固性。pH較低(≤4.0)時(shí)，pH是影響凝固等級的主要因素。
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