產(chǎn)品名稱(chēng)：副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針?lè )ǎ?/strong>
英文名稱(chēng)：Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus（TDH/TRH gene）(Fluorescent Probe Assays)
產(chǎn)品編號與包裝規格：
| 編號 | 規格 |
|---|---|
| FZ008BF2-A | 48 測試/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒適用于水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌的快速定性檢測以及耐熱直接溶血素(thermostable direct hemolysin，TDH)、耐熱直接溶血素相關(guān)溶血素 (thermostable direct hemolysin-related hemolysin，TRH)毒力基因的檢測。其他菌種檢驗需另按照國標《GB4789.7-2013 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 副溶血性弧菌檢驗》開(kāi)展。
檢測原理：基于 Real Time PCR 技術(shù)，利用針對于副溶血性弧菌和毒力基因 TDH 和 TRH 特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應所需試劑，加入待檢樣品即可進(jìn)行擴增反應。在發(fā)生擴增過(guò)程中，熒光探針與目的基因片段結合，可被Taq 酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時(shí)熒光定量PCR 儀可識別該熒光信號，同時(shí)根據其強弱變化繪制出相應的實(shí)時(shí)擴增曲線(xiàn)，進(jìn)而判定副溶血性弧菌和毒力基因是否檢出。
副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針?lè )ǎ┊a(chǎn)品組分：
儲存條件與保質(zhì)期：-20℃避光儲存，有效期為 12 個(gè)月，避免反復凍融。
靈敏度：單通道最低檢驗限達到 100 CFU/Test。
所需其他材料和適用儀器：熒光定量 PCR 儀（具有能夠檢測 FAM、VIC、CY5 標記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針?lè )ǎ?/strong>使用指南：
1，樣品前處理：
1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
a) 取 25 g(mL)待檢樣品，置于 225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水中，36 ℃±1 ℃前增菌8~18 h。
b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 規格的無(wú)菌離心管中，6000 r/min 離心 5 min，完全去除上清；
c) 加入 30 μL 裂解液充分懸浮管底沉淀，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min。
d) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為待測樣品 DNA，靜置冰上，長(cháng)時(shí)間不用應再次離心。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預先加有 30 μL 裂解液的無(wú)菌離心管中，后按照上述步驟 c)、d)操作。
2, 加樣、反應
1) 按照需求取 n 個(gè) PCR 反應管（n=1 管陰性對照+待檢測樣品數+1 管陽(yáng)性對照），從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入20 μL預混液，待用。
2) 向上述 n 個(gè)反應管中分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽(yáng)性對照各 5 μL，總反應體積為 25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行 PCR 擴增反應。
3) PCR 反應體系為 25 μL，取 FAM、VIC、Cy5 檢測通道，在反應階段 2 中 60℃時(shí)收集熒光信號，具體程序如下：
注：在反應階段 2 中 60℃時(shí)收集熒光信號，對于多通道熒光 PCR 儀，取熒光素“FAM、VIC 和 CY5”為信號采集通道，淬滅基團選擇“None”，染料校正選擇“None”。另外，這 3 個(gè)熒光通道分別對應副溶血性弧菌特異性基因、TRH 和 TDH 基因的檢測。
3, 結果：一般情況下，可通過(guò)軟件自動(dòng)設定的基線(xiàn)、閾值等直接讀取檢測結果。如需調整，可根據所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現明顯的 S 型擴增曲線(xiàn)或Ct 值＞35，陽(yáng)性對照出現 S 型擴增曲線(xiàn)且其 Ct 值＜30。若陰陽(yáng)性對照不同時(shí)滿(mǎn)足上述條件，則本次檢測結果無(wú)效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結果判讀：（根據反應所得 Ct 值判讀，具體見(jiàn)下表：）
