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單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡(jiǎn)稱(chēng)單增李斯特菌，是一種人畜共患病的病原菌。國際上公認的李斯特菌共有十個(gè)菌株，而其中單增李斯特菌是唯一能引起人類(lèi)疾病的菌株。單增李斯特菌進(jìn)入人體是否得病，與菌量、宿主的免疫狀態(tài)有關(guān)，因為該菌是一種細胞內寄生菌，宿主對它的清除主要靠細胞免疫功能，因此，新生兒、孕婦、40歲以上的成人，或免疫功能缺陷者很容易受到感染。健康成人個(gè)體感染后，單核細胞增多，會(huì )出現輕微類(lèi)似流感癥狀；新生兒、孕婦、免疫缺陷患者感染后，表現為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)、腦膜炎、敗血癥等，直至死亡。
單增李斯特菌廣泛存在于自然界中，它也是某些食物（主要是牛奶和乳制品，其他如肉類(lèi)(特別是牛肉)；蔬菜；沙拉；海產(chǎn)品；冰淇凌等）中的一種污染物，能引起嚴重食物中毒。該菌能在2-42 ℃下生存(也有報道0 ℃能緩慢生長(cháng))，能在冰箱冷藏室內較長(cháng)時(shí)間生長(cháng)繁殖，是冷藏食品威脅人類(lèi)健康的主要病原菌之一，因此在食品衛生微生物檢驗中，必須加以重視。
廣東環(huán)凱微生物科技有限公司長(cháng)期從事微生物控制和檢測的相關(guān)研究，是我國最早研究、開(kāi)發(fā)食品微生物安全檢測產(chǎn)品的廠(chǎng)家之一，對微生物檢測試劑有著(zhù)成熟的研發(fā)及生產(chǎn)經(jīng)驗。我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監測單位對單增李斯特菌檢測的需求及情況，對單增李斯特菌檢驗相應的培養基進(jìn)行了改進(jìn)，使得單增李斯特菌檢出率較之前有很大的改進(jìn)。擴充并完善了相關(guān)的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。
單增李斯特菌為革蘭氏陽(yáng)性短桿菌,直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀；兼性厭氧、無(wú)芽胞；一般不形成莢膜，但在營(yíng)養豐富的環(huán)境中可形成莢膜；在陳舊培養中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性；該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。該菌營(yíng)養要求不高，在20-25 ℃培養有動(dòng)力，穿刺培養2-5天可見(jiàn)倒立傘狀生長(cháng)，肉湯培養物在顯微鏡下可見(jiàn)翻跟斗運動(dòng)。在的血平板上菌落中等大小，灰白色，可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。
LB1與LB2中胰胨、多價(jià)胨和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長(cháng)因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉，同時(shí)對腸球菌起抑制作用；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩沖劑；七葉苷為可發(fā)酵的糖類(lèi)；萘啶酮酸對革蘭氏陰性桿菌的抑制性較強，而鹽酸吖啶黃素對除李斯特氏菌的革蘭氏陽(yáng)性菌有較強的抑制作用，LB1與LB2兩種培養基對兩種藥物的的配比進(jìn)行了調整，一前一后進(jìn)行選擇性增菌，使得操作人員能順利的將李斯特氏菌從樣品中篩選出來(lái)。
李斯特氏菌雖對營(yíng)養要求不高，但若營(yíng)養不充分，在培養基上的菌落在接種后的一段時(shí)間內將難以用肉眼觀(guān)察到，特別是對于剛剛復蘇的菌株，而0.6 %酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)能滿(mǎn)足李斯特氏菌的營(yíng)養要求， 一般情況下利用其做純化培養；改良Mc Bride(MMA)瓊脂及TSA-YE上，用45°角入射光照射菌落，通過(guò)解剖鏡垂直觀(guān)察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。其成分中甘氨酸、氯化鋰、苯乙醇和復達欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，但MMA抑制性過(guò)強，對李斯特氏菌的生長(cháng)也有一定影響，所以其平板上菌落較小、形態(tài)不典型，很難與雜菌區分，因此，根據長(cháng)期使用經(jīng)驗及實(shí)驗結果結合參考文獻，很多標準進(jìn)行了修訂,采用PALCAM和單增李斯特菌顯色培養基對李斯特氏菌進(jìn)行平板分離。
PALCAM瓊脂中，蛋白胨提供生長(cháng)必須的碳氮源；酵母膏粉和淀粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子；氯化鈉可維持均衡的滲透壓；葡萄糖提供碳源；李斯特氏菌水解七葉苷與鐵離子反應形成黑色的6,7-二羥基香豆素；甘露醇是可發(fā)酵的糖，酚紅是pH指示劑；氯化鋰和其它的抗生素能抑制革蘭氏陰性菌和大多數革蘭氏陽(yáng)性菌。李斯特氏菌在PALCAM平板上生長(cháng)24h后菌落呈黑色，直徑為1mm，在其周?chē)纬梢粋€(gè)黑色環(huán)，培養48h，菌落仍呈黑色，直徑2mm～3mm，除在菌落周?chē)幸画h(huán)外，在菌落中心部位的深層也形成黑點(diǎn)。
李斯特菌顯色培養基中，利用李斯特氏菌中特有的酶類(lèi)及其作用，使不同的菌種顯現出不同的菌落形態(tài)，環(huán)凱CRM014李斯特顯色培養基中—單增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)顯藍色，菌落周?chē)幸徊煌该鳝h(huán)，英諾克李斯特氏菌（Listeria innocua）在該培養基中同樣顯藍色，但菌落周?chē)鸁o(wú)不透明環(huán)。
|
培養基：PALCAM瓊脂 |
培養基：李斯特顯色培養基 |
![\"PALCAM瓊脂-ATCC19115\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128150753.jpg\")
| ![\"李斯特顯色培養基\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128151037.jpg\")
|
依據GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗，我公司推出了一套單核細胞增生李斯特氏菌檢驗解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗單位提供方便。
![\"GB](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128151258.jpg\")
圖1：GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程圖
表1：實(shí)驗操作所用培養基及生化試劑
功能階段
|
實(shí)驗
|
產(chǎn)品序號
|
產(chǎn)品名稱(chēng)
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規格
|
類(lèi)別
|
增菌
|
1
|
CP0490
|
LB1增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶裝）
|
026040
|
李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0100
|
李氏增菌肉湯LB1配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
2
|
CP0500
|
LB2增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶裝）
| |
026040
|
李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0110
|
李氏增菌肉湯LB2配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
平板分離
|
3
|
026070
|
PALCAM瓊脂培養基
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0140
|
PALCAM瓊脂配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
4
|
CRM014
|
李斯特菌顯色培養基
|
1000 mL
|
瓶（干粉）
| |
CRM014 P1
|
李斯特菌顯色培養基平板
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
初篩
|
5
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
|
6
|
075110
|
鼠李糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
7
|
026020
|
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
| |
026020A
|
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂平板（TSA-YE）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
生理生化
|
8
|
029010
|
革蘭氏染色液
|
10ml×4瓶
|
盒
|
10
|
075660
|
SIM培養管（SIM動(dòng)力培養基）
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
026050
|
半固體瓊脂
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
075350A
|
半固體瓊脂
|
10 ml×20支
|
盒（管裝）
| ||
075350
|
半固體瓊脂
|
20支
|
盒（西林瓶）
| ||
11
|
029161
|
過(guò)氧化氫酶試劑
|
2 mL/支×10
|
盒
| |
12
|
075010
|
葡萄糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
13
|
075030
|
麥芽糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
14
|
075040
|
甘露醇
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
15
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
16
|
075140
|
七葉苷
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
17
|
075250
|
葡萄糖磷酸鹽胨水
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
029040
|
甲基紅試劑
|
10 mL
|
瓶
| ||
029050
|
VP試劑
|
10 ml×2
|
盒
| ||
18
|
024070
|
血平板（成品培養基）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| |
024060
|
血瓊脂基礎
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
19
|
ATCC 6538
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| |
ATCC 25923
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
CMCC(B) 26003
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
20
|
071820
|
單核增生性李斯特氏菌生化鑒定盒
|
10種×10次
|
盒（西林瓶）
| |
21
|
HK-MID-67
|
HK-MID-Listeria李斯特氏菌鑒定系統
|
10 tests
|
盒
| |
選作項目
| |||||
生理生化
|
22
|
026010
|
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯（TSB-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0090
|
EB增菌液配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
|
在日常生活匯總，由于單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長(cháng)繁殖，所以冰箱食品需加熱后再食用，防止食物中毒的危險，
在食品生產(chǎn)行業(yè)中，單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細菌群，使單增李斯特氏菌在沒(méi)有競爭的環(huán)境條件下易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達到70℃持續2分鐘以上。
相關(guān)國標下載地址：
GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 |
http://www.sveltematerialui.cn/Train/HBdetail_105020015_100000035133931.html |
