一、傳代和培養
工作菌種的傳代次數應嚴格控制，不得超過(guò)5代，（從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代）防止過(guò)度的傳代造成菌種變異。
1代是指將活的培養物接種到新鮮培養基中，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時(shí)，實(shí)驗室應對工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認。
細菌的接種、分離和培養
常用培養基種類(lèi)：斜面培養基、半固體培養基、液體培養基、平板培養基。
接種方法：涂布法、劃線(xiàn)法、穿刺法、直接加入法等
分離：為了獲得純菌種（株），采用的將細菌分離成單個(gè)細胞，使其獨立分裂繁殖形成單個(gè)菌落的操作技術(shù)。
分離一般采用平板培養基。
分離方法主要有分段劃線(xiàn)法、連續劃線(xiàn)法、涂布分離法、傾注分離法等。
培養：接種后的培養基，根據不同微生物生長(cháng)條件的要求，將培養基放在適宜微生物生長(cháng)的環(huán)境中（溫度、濕度、氧氣等），使其生長(cháng)繁殖的過(guò)程。需氣菌培養法和厭氧培養法。
培養后微生物的生長(cháng)判斷
固體培養基
液體培養基
二、菌種的檢查與復壯
菌種的衰退：菌種經(jīng)過(guò)長(cháng)期人工傳代培養或保藏，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變弱或消失的現象。
控制菌種的衰退方法
1,控制傳代次數 盡量避免不必要的接種和傳代，降低突變幾率。采用良好的傳代保藏方法?！吨袊幍洹?010年版規定，傳代次數不得超過(guò)5代。2,創(chuàng )造適宜的培養條件
3,用不同類(lèi)型的細胞進(jìn)行傳代
4,采用有效的保藏方法
定期檢查
主要檢查項目：菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學(xué)檢查。
菌種的復壯： 使衰退的菌種重新恢復原來(lái)的優(yōu)良特性的 過(guò)程驗室主要采用分離純化的方法。
三、菌種的管理
1、使用菌種的單位，應具備從事微生物工作的條件和設備。 菌種應由專(zhuān)人負責管理，管理人員應具有微生物專(zhuān)業(yè)知識和技術(shù)水平，并應具有較強的責任心。
2、實(shí)驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；
包括：每支菌種標注名稱(chēng)、標準號、接種日期、傳代次數、進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷(xiāo)毀的記錄、標準菌種的申購記錄、從標準菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉種傳代，鑒定（純度、特性）、培養基和培養條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。
3 、菌種應冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應有專(zhuān)用的冰箱，應上鎖管理。
4、由專(zhuān)人按操作規程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對保存的菌種進(jìn)行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現菌種的異常情況應及時(shí)檢查。一旦發(fā)現菌種污染和變異現象，應立即報告、研究處理。尤其長(cháng)期保存時(shí)。
5、詳細記錄
菌種的來(lái)源、接收、傳代、分離、復壯、使用和鑒定等均應做好詳細記錄。包括菌保存位置、環(huán)境（溫度）、種傳代或使用時(shí)間、名稱(chēng)、菌號、代數、傳代或保存形式、分離、復壯方式、使用內容、鑒定情況等都應進(jìn)行詳細的記錄。菌種不得隨意帶出實(shí)驗室，外單位索取、購買(mǎi)應有證明和登記，并包裝嚴密。
菌種處理應嚴格按操作規程進(jìn)行，滅菌處理應有詳細記錄。
